Эритропоэтин: допинг-контроль, тесты

Источник:
Эндокриная система, спорт и двигательная активность.
Перевод с англ./под ред. У.Дж. Кремера и А.Д. Рогола. - Э64
Издательство: Олимп. литература, 2008 год.

Введение теста на рекомбинантный эритропоэтин в рамках допинг-контроля на Олимпийских играх в Сиднее в 2000 г. стало значительным шагом вперед в борьбе с применением стимулирующих препаратов (Kazlauskas et al., 2002). Это был первый случай, когда в официальной программе допинг-контроля применен тест, позволяющий обнаружить разницу между рекомбинантной и эндогенной формой гормона. В настоящий момент определение рекомбинантного эритропоэтина человека основано на применении двух различных методов. Первый — это анализ образца мочи (Lasne, Ceaurriz, 2000; Lasne et al., 2002), в котором использован метод ИЭФ в сочетании с методом “двойного блоттинга", обеспечивающего визуализацию полос белка наряду со значительно сниженным фоновым окрашиванием (Lasne, 2001, 2003). Суть этого метода заключается в анализе набора изоформ ЕРО в образце, который будет различаться в случае рекомбинантного и эндогенного гормонов (Lasne et al., 2002; De Frutos ct al., 2003). Причина этих различий заключается в том, что гликозилирование белка в значительной степени зависит от того, в каких клетках происходит его экспрессия. Поскольку рекомбинантный эритропоэтин получают главным образом с использованием клеток яичника китайского хомячка, характер гликозилирования белка будет отличаться от такового в почках человека (Sasaki et al., 1987; Rice et al., 1992). Данная методика определения рекомбинантного эритропоэтина применяется в нескольких аккредитованных лабораториях МОК, а также используется для допинг-контроля многими спортивными ассоциациями (Catlin et al., 2002; Breidback et al., 2003).

Основным недостатком данной методики являются относительно высокая стоимость анализа и необходимость значительного времени для его проведения. Кроме того, применение допинга у спортсмена может быть обнаружено только в течение 3—4 дней после инъекции (Wide et al., 1995; Souillard et al., 1996). Попытки избавиться от этих недостатков привели к созданию методов, основанных на обнаружении изменений гематологических параметров, обусловленных введением эритропоэтина. Было показано, что уровень этих изменений заметно превышает естественную вариабельность и некоторые из них наблюдаются в течение четырех недель после применения рекомбинантного гормона (Parisotto et al., 2001; Gore et al., 2003). Так называемый “анализ крови второго поколения” включает определение ЕРО и растворимого рецептора трансферина с помощью методов иммуноанализа. Несмотря на то что этот тест более простой, требует значительно меньше затрат и позволяет с гораздо большей вероятностью обнаружить случаи злоупотребления рекомбинантным эритропоэтином, для его проведения требуется забор образца крови и, кроме того, при снижении пороговой границы до уровня, который позволяет отсеивать большую часть лиц, злоупотребляющих гормональными препаратами, происходит увеличение количества фальшивых позитивных результатов. Поэтому в настоящее время тесты на основе анализа крови применяются в качестве средства первичного скрининга для обнаружения образцов, с высокой вероятностью содержащих рекомбинантный эритропоэтин, а результаты ИЭФ белков, содержащихся в моче, используются в качестве подтверждения только для подозрительных образцов.

Было продемонстрировано, что использование “анализа крови второго поколения” для первичного скрининга позволяет существенно снизить затраты на выявление позитивных образцов с помощью анализа гормона в моче (Gore et al., 2003). Кроме того, была проделана обширная работа, направленная на определение нормативных данных и поиск факторов, которые могут оказывать влияние на результаты теста (Sharpe et al., 2002; Ashcnden et al., 2003; Parisotto et al., 2003). Вместе с тем не стоит забывать о том, что рекомбинантное происхождение эритропоэтина, обнаруженного в моче, может быть доказано только с помощью ИЭФ, выявляющего специфический характер гликозилирования.

Проверенные форумы спортивной фармакологии

Поиск

Эритропоэтин: допинг-контроль, тесты